常用的药敏试验方法-----纸片法

纸片法

纸片法是将含有药物的纸片置于已接种待测菌的固体培养基上,抗菌药物通过向培养基内的扩散,抑制敏感菌的生长,从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远,达到该距离的药物浓度越低,故可根据抑菌环的大小,来判断细菌对药物的敏感度。该法是生产中最常应用的药敏试验,它操作简便,容易掌握,但只用于定性。

1.试验材料

(1)普通琼脂培养基或特殊培养基(2)药敏纸片 各类药敏纸片可由市场购买或自制(药敏纸片的制各见附页)。(3)被试细菌 从待检病料中分离出细菌作为被试细菌菌株。

2.试验步骤方法(

1)用灭菌接种环挑取待试细菌的纯培养物,以划线接种方式将挑取的细菌涂布到普通琼脂平板上或其它特殊培养基平板上(愈密愈好,且浓度要均匀);或者挑取待试细菌于少量灭菌生理盐水中制成细菌混悬液,用灭菌棉拭子沾取菌液涂布到培养基平板上,尽可能涂布的致密而均匀。(2)用尖头镊子,镊取已制各好的各种药敏纸片分别密贴到上述已接种好细菌的培养基表面。为了使药敏试片与培养基表面密贴,可用镊子轻轻按压纸片。纸片在培养基上的分布,一般可为中央贴一种纸片,外周以等距离贴若干种纸片。一个直径90mm的平皿可贴5~6个药敏纸片。每一个药敏纸片上应有标记,或每贴一种纸片后,在平皿底背面标记上其药物种类。(3)将贴好药敏纸片的平皿底部朝下,置37℃温箱中培养24小时,取出观察结果。

3.观察结果与判定标准

(1)经培养后,凡对被试细菌有抑制作用的药物,在其纸片周围出现一个无菌生长区7称为抑菌圈(环)。可用直尺测量抑菌圈的大小,抑菌圈越大,说明该药物对被试菌的抑制杀灭作用越强,反之越弱。若无抑菌圈,则说明该菌对此药具有较强的耐药性。(2)判定结果时,应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。(3)经药敏试验后:,应首先选择高敏药卿进行治疗,也可选用两种药物协助应用,以提高疗效,减少耐药菌株的产生。